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Abstract
  • Transglutaminase 1 (TGase1) is modified by myristoylation and palmitoylation supposedly in its cysteine cluster region. In order to monitor acylation in protein expression we developed a target mass spectrometry method using synthetic peptide SFWARCPalmCamGCamCamSCamR as a standard. It is palmitoylated at Cys6 and carbamidomethylated on the remaining cysteines to enable its use as surrogate peptide for the tryptically generated peptide from TGase1. The method allows the specific detection of the peptide based on its retention time in reversed-phase chromatography and its gas phase fragmentation pattern. In addition, the presence of a myristoyl group and of the peptide with no missed cleavages was programmed.
Zusammenfassung
  • Transglutaminase 1 (TGase1) wird vermutlich in seiner Cystein-Cluster-Region myristoyliert und palmitoyliert. Eine massenspektrometrische Targetanalyse unter Verwendung des synthetischen Peptides SFWARCPalmCamGCamCamSCamR wurde entwickelt, um die Protein-Acylierung zu messen. Das Peptid ist palmitoyliert an Cys6 und carbamidomethyliert an den restlichen Cysteinen, um es als Standard für das tryptische Peptid von TGase1 verwenden zu können. Die Method erlaubt die spezifische Bestimmung des Peptides basierend auf seiner chromatographischen Retentionszeit und seinen Gasphasen-Fragmentionen. Die Anwesenheit einer Myristoylgruppe sowie das bei vollständiger tryptischer Spaltung entstehend Peptid wurden ebenfalls programmiert.
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