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- TitleHerstellung und Charakterisierung von Fusionsproteinen aus Green Fluorescent Protein (GFP) und Glykoprotein L (gL) von Herpes simplex-Virus Typ 1 (HSV-1) : Herstellung und Charakterisierung von Fusionsproteinen aus Green Fluorescent Protein (GFP) und Glykoprotein L (gL) von Herpes-simplex-Virus Typ 1 (HSV-1)
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- LanguageGerman
- Document typeDissertation (PhD)
- Keywords (DE)
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Zusammenfassung
Wir untersuchten das Expressionsmuster eines Fusionsproteins aus gL und EGFP/ EYFP in Säugerzellen und das Verhalten bei der Virusreplikation. Mittels PCR wurde das aus dem Vektor pEUKT7C1gL amplifizierte gL-Gen in den Vektor pEGFPgDproT7 kloniert, später die EGFP -Sequenz gegen EYFP ausgetauscht. Die Expression erfolgte unter der Kontrolle des HSV-1 gD-Promotors. Nach der Infektion mit HSV-1 wiesen die Zellen eine ausgeprägte, überwiegend membranständige Autofluoreszenz auf. Es wurden Zelllinien, die das grün/ gelb fluoreszierende Fusionsprotein stabil unter der Kontrolle des viralen Promotors exprimierten, etabliert. Beide Fusionsproteine (ca. 65 kDA) konnten im Western-Blot mit EGFP–spezifischem Antiserum nachgewiesen werden. Es wurde gezeigt, dass das gL -Fusionsprotein in die Virushülle eingebaut wird. Die Hemmung der viralen DNA-Synthese durch Aciclovir bewirkte keine Minderung der gLEGFP-Expression. Das zeitliche Muster der Expression entsprach dem eines Early/Late-Proteins.
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