Gorenflo, Volker: Entwicklung und Optimierung eines Produktionsverfahrens zur Herstellung neuartiger 4HV-haltiger Biopolyester im Pilotmaßstab. 1999
Inhalt
- Einleitung
- Material und Methoden
- Organismen und Plasmide
- Medien
- Mineralmedium (Schlegel et al., 1961)
- Nutrient Broth Medium (NB-Medium) (Sambrook et al., 1989)
- Luria-Bertani Medium (LB-Medium) (Sambrook et al., 1989)
- M9-Medium (Miller, 1972, modifiziert)
- Antibiotika
- Stammhaltung
- Herstellung von Substraten
- Kultivierung von Mikroorganismen
- Zellanzucht im Schüttelkolben
- Akkumulation von Polyhydroxyfettsäuren im Schüttelkolbenversuch
- Zellanzucht im Fermenter
- Akkumulation von Polyhydroxyfettsäuren unter kontrollierten Fermentationsbedingungen
- Automatisierung der Fed-Batch-Fermentation
- Trübungsmessung
- Reinheits- und Plasmidkontrollen
- Analyse von Substraten und Metaboliten
- Simultane Bestimmung von Glucose, Fructose, Gluconsäure, Acrylsäure, Lävulinsäure und deren Metaboliten
- Simultane Bestimmung von Octansäure und Lävulinsäure
- Schnelltest für Glucose und Ammonium
- Gaschromatographische Analyse der Kulturüberstände
- Zellflockung und Zellernte
- Isolierung von Polyhydroxyfettsäuren (PHF)
- Analyse von Polyhydroxyfettsäuren
- Nachweis von Polyhydroxyfettsäuren durch Nilrot (Gorenflo et al., 1999)
- Experimente und Ergebnisse
- Optimierung der Produktion 4HV˚haltiger Polyester
- Voruntersuchungen zur Akkumulation 4HV-haltiger Polyester
- Optimierung der Zellanzucht
- Übertragung der Kultivierung vom Schüttelkolben (50€ml) in den 15€l˚Maßstab
- Optimierung der Speicherbedingungen im Fermenter
- Hochzelldichtefermentationen mit P.€putida GPp104 (pHP1014::E156) im 20€l˚Maßstab
- Nicht automatisierte Fed-Batch-Fermentationen mit Octansäure als Substrat in der Wachstumsphase
- Automatisierung der Fed-Batch-Fermentation mit Octansäure als Substrat in der Wachstumsphase
- Kultivierungen mit Gluconsäure als Substrat in der Wachstumsphase
- Fed-Batch-Fermentationen mit Glucose oder Gluconsäure als Substrat in der Wachstumsphase
- Hochzelldichtefermentation von Ralstonia eutropha im 20€l˚Maßstab
- Herstellung 4HV-haltiger Polyesterproben für die Bestimmung ihrer Werkstoffeigenschaften
- Übertragung der Fermentation in den 500€l-Pilotmaßstab
- Optimierung der Akkumulation 4HV˚haltiger Polyester durch Eingriffe in den Lävulinsäurekatabolismus von R.€eutropha€HF39
- Phänotypische Charakterisierung der Tn5-Mutanten von R.€eutropha€HF39
- Speicherversuche mit im Lävulinsäurekatabolismus defekten Tn5˚Mutanten von R.€eutropha€HF39
- Hemmung der (-Oxidation in R.€eutropha€HF€39 durch Acrylsäure
- Fed-Batch-Fermentation von R.€eutropha€SK7291 im 25€l-Maßstab
- Optimierung der Produktaufbereitung 4HV-enthaltender Polyester
- Optimierung der Fest-Flüssig-Trennung durch Flockung
- Optimierung der Isolierung von Polyhydroxyfettsäuren
- Nachweis von Polyhydroxyfettsäuren durch Nilrot
- Diskussion
- Optimierung der biotechnologischen Produktion 4HV-haltiger Polyester
- Entwicklung eines Fermentationsprozesses im 20€l˚Maßstab
- Optimierung der Fermentationsparameter im Batch-Prozeß
- Erhöhung der Zelldichte durch die Entwicklung eines Fed-Batch-Prozesses
- Automatisierung des Fed-Batch-Prozesses
- Fed-Batch-Fermentation mit Gluconsäure oder Glucose als Substrat
- Polyesterakkumulationsverhalten der rekombinanten Stämme von P.€putida GPp104 auf Gluconsäure oder Glucose
- Kultivierung mit Co˚Substrat
- Automatisierung der Zufuhr von Ammonium
- Bildung von 2˚Ketogluconsäure während der Fermentation von Pseudomonas putida auf Gluconsäure oder Glucose
- Einfluß von rekombinanter DNA auf das Zellwachstum des Wirtsstammes
- Übertragung der Fermentation von P.€putida in den 500€l-Maßstab
- Optimierung der Akkumulation 4HV˚haltiger Polyester durch Eingriffe in den Lävulinsäurekatabolismus von R.€eutropha€HF39
- „Metabolic Engineering“ durch Tn5˚induzierte Mutagenese von R.€eutropha€HF39
- „Metabolic Engineering“ durch Hemmung der (˚Oxidation mittels Acrylsäure
- Produktgewinnung und -aufbereitung
- Material- und Werkstoffeigenschaften 4HV˚haltiger Polyester
- Nachweis von Polyhydroxyfettsäuren durch Nilrot
- Zusammenfassung
- Literatur
- Anhang