Inhalt

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   I. Zusammenfassung
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  II. Einleitung
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   II.1 Die Bedeutung des MPO/ HOCl- Systems für entzündliche Prozesse
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   II.1.1 Die Myeloperoxidase
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   II.2 Die Bedeutung erhöhter MPO- Konzentrationen im Plasma für die Immunabwehr und die Entstehung von Erkrankungen
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   II.2.1 Atherosklerose
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   II.2.1.1.1 Die „Response- to- injury“- Theorie
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   II.2.1.1.2 Die Lipidtheorie
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   II.2.2 Glomerulosklerose
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   II.2.3 Rheumatoide Arthritis
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   II.2.4 Diabetes mellitus
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   II.3 Plättchenaktivierung durch oxidiertes LDL
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   II.4 Modifikation von Proteinen durch das MPO/ HOCl- System
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   II.4.1 Modifikation von Albumin durch das MPO/ HOCl- System
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  II.5 ROS- Inhibitoren
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   II.5.1 Flavonoide
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   II.5.1.1.1 Quercetin
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   II.5.1.1.2 Kämpferol
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   II.5.1.1.3 Resveratrol
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   II.5.2 Parthenolid
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   II.5.3 Taurin
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   II.5.4 Carnosin
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   II.5.5 Lipoamid
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  II.6 Herzunterstützungssysteme
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   II.6.1 Einsatz und Folgen des Einsatzes von Herzunterstützungssystemen
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   II.6.2 INCOR Heart (Berlin Hearts AG)
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   II.7 Die Fragestellung und das Ziel dieser Arbeit
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  III. Material und Methoden
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  III.1 Geräte
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   III.1.1 Durchflusszytometrie
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   III.1.2 Zentrifugen
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   III.1.3 Weitere Geräte
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   III.2 Chemikalien
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   III.3 Antikörper
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   III.4 Lösungen
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  III.5 Präparation der Thrombozyten und Monozyten
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   III.5.1 Gewinnung der Blutzellen
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   III.5.2 Herstellung von Plättchenreichem Plasma (PRP)
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   III.5.3 Isolierung der Thrombozyten durch Gelfiltration
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   III.5.4 Zellzählung
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  III.6 Durchflusszytometrie
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   III.6.1 Erläuterung des Prinzips der Durchflusszytometrie
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  III.6.2 Probenvorbereitung und Durchführung der Versuche zur Untersuchung der Zellen
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   III.6.2.1 Probenvorbereitung und Durchführung der Versuche mit PRP oder gelfiltrierten Thrombozyten:
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   III.6.2.2 Probenvorbereitung und Durchführung der Versuche mit Vollblut
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   III.6.3 Zellaktivierung
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  III.6.4 Nachweis der Zellaktivierung
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  III.6.4.1 Nachweis der Thrombozytenaktivierung
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   III.6.4.1.1 Nachweis der Anbindung von FITC- markiertem Fibrinogen
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   III.6.4.1.2 Nachweis der Freisetzung der Alpha- Granula: Präsentation von CD62 P
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   III.6.4.1.3 Nachweis der Freisetzung der „dense bodies“: Präsentation von CD63
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   III.6.4.1.4 Nachweis der Rückbindung endogenen Thrombospondins 1 (TSP-1)
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   III.6.4.1.5 Annexin V
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   III.6.4.1.6 Mikropartikel
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  III.6.4.2 Nachweis der Monozytenaktivierung
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   III.6.4.2.1 Nachweis der Anbindung von FITC- markiertem Fibrinogen
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   III.6.4.2.2 Nachweis des Mac- 1- Rezeptors
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   III.6.5 Hemmung der Aktivierung von Thrombozyten und Monozyten durch Idea-HSA
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   III.6.5.1 Parthenolid
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   III.6.5.2 Quercetin
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   III.6.5.3 Kaempferol
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   III.6.5.4 Resveratrol
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   III.6.5.5 Carnosin
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   III.6.5.6 Lipoamid
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   III.6.5.7 Taurin
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   III.6.6 Durchführung der Versuche zur Passage von Fragmin- antikoaguliertem Vollblut durch das Herzunterstützungssystem „INCOR“ unter dem Einfluss von Parthenolid: Probenvorbereitung und Versuchsdurchführung
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   III.7 Kopplung von Fluorescein- Isothiocyanat (FITC) an Fibrinogen
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   III.8 Statistische Auswertung der experimentellen Daten
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  IV. Ergebnisse
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  IV.1 Aktivierung von Blutzellen mit Idea- HSA
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  IV.1.1 Aktivierung von Thrombozyten mit Idea- HSA
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   IV.1.1.1 Fibrinogen- Bindung
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   IV.1.1.1.1 Idea-HSA induzierte Fibrinogen- Bindung an gelfiltrierte Thrombozyten
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   IV.1.1.1.2 Idea-HSA induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten im Plättchen- reichen Plasma
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   IV.1.1.1.3 Idea-HSA induzierte Fibrinogen- Bindung im Vollblut
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   IV.1.1.2 Idea-HSA induzierte Präsentation von CD 62 P auf der Thrombozytenoberfläche: Sekretion der alpha- Granula
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   IV.1.1.3 Präsentation von CD 63 auf der Thrombozytenoberfläche: Sekretion der elektronendichten Granula
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   IV.1.1.4 Idea-HSA induzierte Bildung von thrombozytären Mikropartikeln
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  IV.1.1.5 Bindung von Annexin V an gelfiltrierte Thrombozyten
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   IV.1.1.5.1 Idea-HSA induzierte Bindung von Annexin V an gelfiltrierte Thrombozyten
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   IV.1.1.5.2 Thrombin und Kollagen induzierte Bindung von Annexin V an Thrombozyten
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   IV.1.1.5.3 RFYVVMWK induzierte Bindung von Annexin V an Thrombozyten
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   IV.1.1.6 Bindung von endogenem Thrombospondin-1 an Thrombozyten
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   IV.1.1.6.1 Idea-HSA induzierte Bindung von endogenem Thrombospondin-1 an gelfiltrierte Thrombozyten
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   IV.1.1.6.2 Idea-HSA induzierte Bindung von endogenem Thrombospondin-1 an Thrombozyten im Plättchen- reichen Plasma
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   IV.1.2 Aktivierung von Monozyten mit Idea-HSA
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   IV.1.2.1 Idea-HSA induzierte MAC-1- Expression auf Monozyten
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   IV.1.2.2 Idea-HSA induzierte Fibrinogen- Bindung an Monozyten
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   IV.2 Inhibierung der Idea-HSA induzierten Blutzellaktivierung
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  IV.2.1 Parthenolid
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  IV.2.1.1 Einfluss von Parthenolid auf die Thrombozytenaktivierung mit Idea- HSA
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   IV.2.1.1.1 Einfluss von Parthenolid auf die Idea-HSA induzierte Fibrinogen-Bindung an Thrombozyten
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   IV.2.1.1.1.1 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea- HSA induzierte Fibrinogen- Bindung an gelfiltrierte Thrombozyten
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   IV.2.1.1.1.2 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea-HSA induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten im Plättchen- reichen Plasma
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   IV.2.1.1.1.3 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea-HSA induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten in Vollblut
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   IV.2.1.1.2 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea-HSA induzierte Präsentation von CD 62 P auf der Thrombozytenoberfläche
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   IV.2.1.1.3 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea-HSA induzierte Präsentation von CD 63 auf der Thrombozytenoberfläche
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   IV.2.1.1.4 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea-HSA induzierte Bildung von thrombozytären Mikropartikeln
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  IV.2.1.1.5 Einfluss von Parthenolid auf die Bindung von Annexin V an gelfiltrierte Thrombozyten
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   IV.2.1.1.5.1 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea- HSA induzierte Bindung von Annexin V an gelfiltrierte Thrombozyten
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   IV.2.1.1.5.2 Einfluss von Parthenolid auf die Bindung von Annexin V an Thrombozyten bei Aktivierung mit Thrombin und Kollagen
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   IV.2.1.1.5.3 Einfluss von Parthenolid auf die Bindung von Annexin V an Thrombozyten bei Aktivierung mit RFYVVMWK
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  IV.2.1.1.6 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea-HSA induzierte Bindung von endogenem Thrombospondin-1 an Thrombozyten
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   IV.2.1.1.6.1 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea-HSA induzierte Bindung von endogenem Thrombospondin-1 an gelfiltrierte Thrombozyten
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   IV.2.1.1.6.2 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea-HSA induzierte Bindung von endogenem Thrombospondin-1 an Thrombozyten im Plättchen- reichen Plasma
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   IV.2.1.2 Einfluss von Parthenolid auf die Monozytenaktivierung mit Idea- HSA
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   IV.2.1.2.1 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea-HSA induzierte Mac-1- Expression auf Monozyten
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   IV.2.1.2.2 Einfluss des Parthenolid auf die Fibrinogen- Bindung auf Monozyten
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   IV.2.2 Quercetin
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   IV.2.2.1 Einfluss von Quercetin auf die durch Idea-HSA induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten
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  IV.2.3 Kämpferol
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   IV.2.3.1 Einfluss von Kämpferol auf die durch Idea-HSA induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten
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  IV.2.4 Resveratrol
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   IV.2.4.1 Einfluss von Resveratrol auf die durch Idea-HSA induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten
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   IV.2.5 Carnosin
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   IV.2.5.1 Einfluss von Carnosin auf die durch Idea-HSA induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten
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  IV.2.6 Taurin
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   IV.2.6.1 Einfluss von Taurin auf die durch Idea-HSA induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten
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  IV.2.7 Lipoamid
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   IV.2.7.1 Einfluss von Lipoamid auf die durch Idea-HSA induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten
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  IV.3 Passage von Fragmin- antikoaguliertem Vollblut durch Herzunterstützungssysteme unter dem Einfluss von Parthenolid
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   IV.3.1 Aktivierbarkeit der Thrombozyten durch ADP: Fibrinogenbindung
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   IV.3.2 Aktivierbarkeit der Thrombozyten durch TRAP: Präsentation von CD63 auf der Thrombozytenoberfläche
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   IV.3.3 Bindung von Annexin V an Thrombozyten
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   IV.3.4 Mac- 1- Expression auf Monozyten
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  V. Diskussion
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   V.1 Aktivierung von Blutzellen mit Idea- HSA
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  V.1.1 Aktivierung von Thrombozyten mit Idea- HSA
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   V.1.1.1 Idea- HSA- induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten
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   V.1.1.2 Idea- HSA- induzierte Präsentation von CD 62 P auf der Thrombozytenoberfläche: Sekretion der alpha- Granula
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   V.1.1.3 Idea- HSA- induzierte Präsentation von CD 63 auf der Thrombozytenoberfläche: Sekretion der elektronendichten Granula
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   V.1.1.4 Idea- HSA- induzierte Bildung einer prokoagulanten Oberfläche auf Thrombozyten und Bildung von thrombozytären Mikropartikeln
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   V.1.1.4.1 Vergleich von Idea-HSA mit durch Thrombin und Kollagen induzierter Bildung einer prokoagulanten Oberfläche auf Thrombozyten
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   V.1.1.4.2 RFYVVMWK- induzierte Bindung von Annexin V an Thrombozyten
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   V.1.1.5 Idea- HSA- induzierte Bindung von endogenem Thrombospondin-1 an Thrombozyten
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   V.1.2 Aktivierung von Monozyten mit Idea- HSA
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   V.2 Inhibition der Blutzellaktivierung durch Idea- HSA
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   V.2.1 Parthenolid
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   V.2.1.1 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea-HSA induzierte Thrombozytenaktivierung
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   Einen weiteren wichtigen Schritt im Rahmen der Thrombozytenaktivierung stellt die Sekretion der thrombozytären Granula dar. Daher wurde zunächst der Einfluss des Parthenolid auf die durch Idea- HSA induzierte Sekretion der alpha- Granula untersucht.
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   V.2.1.1.1 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea- HSA- induzierte Bildung von thrombozytären Mikropartikeln und Ausbildung des prokoagulanten Zustandes von Thrombozyten
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   V.2.1.1.2 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea- HSA induzierte Bindung von endogenem Thrombospondin-1 an Thrombozyten
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   V.2.1.2 Einfluss von Parthenolid auf die durch Idea- HSA induzierte Monozytenaktivierung
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  V.2.2 Quercetin
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   V.2.2.1 Einfluss von Quercetin auf die durch Idea- HSA- induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten
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  V.2.3 Kaempferol
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   V.2.3.1 Einfluss von Kämpferol auf die durch Idea- HSA- induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten
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  V.2.4 Resveratrol
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   V.2.4.1 Einfluss von Resveratrol auf die durch Idea- HSA- induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten
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  V.2.5 Carnosin
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   V.2.5.1 Einfluss von Carnosin auf die durch Idea- HSA- induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten
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  V.2.6 Taurin
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   V.2.6.1 Einfluss von Taurin auf die durch Idea- HSA- induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten
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  V.2.7 Lipoamid
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   V.2.7.1 Einfluss von Lipoamid auf die durch Idea- HSA- induzierte Fibrinogen- Bindung an Thrombozyten
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   V.3 Passage von Fragmin-antikoaguliertem Vollblut durch das Herzunterstützungssystem INCOR Heart LVAD unter dem Einfluss von Parthenolid
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   V.3.1 Einfluss von Parthenolid auf die Aktivierung und Aktivierbarkeit von Thrombozyten bei Passage durch das INCOR Heart LVAD
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   V.3.2 Einfluss von Parthenolid auf die Aktivierung und Aktivierbarkeit von Monozyten bei Passage durch das INCOR Heart LVAD
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   V.3.3 Zusammenfassung
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   VI. Abkürzungsverzeichnis
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   VII. Literaturverzeichnis
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   VIII. Danksagung
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   IX. Lebenslauf