Bangel, Nadine: Molekulare Charakterisierung des epithelialen Na+-Kanals (ENaC) aus Nasengewebe von Patienten mit und ohne Mukoviszidose. 2006
Inhalt
- Inhaltsverzeichnis
- Abbildungsverzeichnis
- Tabellenverzeichnis
- Abkürzungsverzeichnis
- 1 Einleitung
- 1.1 Ionentransport über Epithelien
- 1.2 Mukoviszidose (Cystische Fibrose, CF)
- 1.3 Der Amilorid-sensitive epitheliale Natrium Kanal (ENaC)
- 1.4 Der ENaC im respiratorischen Epithel
- 1.5 Die Rolle von ENaC bei CF
- 1.6 Ziele der Arbeit
- 2 Material und Methoden
- 2.1 Gewebeproben: Menschliche Nasenpolypen
- 2.2 Mikrobiologische Methoden
- 2.2.1 Bakterienstamm
- 2.2.2 Plasmidvektor
- 2.2.3 Nährmedien und Agarplatten
- 2.2.4 Blau-Weiß-Selektion
- 2.2.5 Glycerinkultur
- 2.2.6 Flüssigkulturen
- 2.2.7 Herstellung kompetenter Bakterien
- 2.2.8 Transformation kompetenter Bakterien
- 2.3 Allgemeine molekularbiologische Methoden
- 2.3.1 Präzipitation von Nukleinsäuren
- 2.3.2 Konzentrationsbestimmung von Nukleinsäuren
- 2.3.3 Präparation von Plasmid-DNA
- 2.3.4 Restriktionsverdau
- 2.3.5 DNA-Gelelektrophorese
- 2.3.6 Lösungen für die DNA-Gelelektrophorese
- 2.3.7 RNA-Gelelektrophorese
- 2.3.8 Isolierung von DNA-Fragmenten aus Agarosegelen
- 2.3.9 Präparation von Gesamt-RNA aus Nasenpolypen
- 2.4 PCR Techniken
- 2.5 PCR Techniken mit RNA
- 2.5.1 Reverse Transkription - Polymerasekettenreaktion (RT-PCR)
- 2.5.2 5`RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends)
- 2.5.3 3`RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends)
- 2.5.4 Semi-quantitative RT-PCR
- 2.5.5 Semi-quantitative Analyse der RT-PCR
- 2.5.6 Real-time PCR mit Sybr Green I
- 2.5.7 Real-time PCR Datenanalyse
- 2.5.8 Klonierung von PCR-Fragmenten
- 2.5.9 Das TOPO TA System
- 2.5.10 DNA-Sequenzierung und Sequenzdatenanalyse
- 2.6 Allgemeine proteinbiochemische Methoden
- 2.6.1 Proteinbestimmung nach Bradford
- 2.6.2 Bradford Lösung
- 2.6.3 Eichgerade zur Konzentrationsbestimmung von Proteinen
- 2.6.4 SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese (PAGE)
- 2.6.5 Probenvorbereitung
- 2.6.6 Gelzusammensetzung (SDS-PAGE)
- 2.6.7 Semidry Western Blot
- 2.6.8 Lösungen Semidry Western Blot
- 2.6.9 Densitometrische Auswertung der Western Blots
- 3 Ergebnisse
- 3.1 Molekulare Charakterisierung der α-, β- und γ-hnENaC Untereinheiten aus CF und nicht-CF Nasenepithel
- 3.1.1 Überprüfung der Qualität von Gesamt-RNA
- 3.1.2 Molekulare Charakterisierung der α-hnENaC Untereinheit aus CF und nicht-CF Nasenepithel
- 3.1.3 Molekulare Charakterisierung der β-hnENaC Untereinheit aus CF und nicht-CF Nasenepithel
- 3.1.4 Molekulare Charakterisierung der γ-hnENaC Untereinheit aus CF und nicht-CF Nasenepithel
- 3.2 Expression der α-, β- und γ-hnENaC Untereinheiten aus CF und nicht-CF Nasenepithel
- 3.3 Biochemische Charakterisierung der α-, β- und γ-hnENaC Untereinheiten aus CF und nicht-CF Nasenepithel
- 4 Diskussion
- 4.1 Molekulare Klonierung von hnENaC aus CF und nicht-CF Nasenepithel
- 4.2 Vergleich der hnENaC mRNA Expression in CF und nicht-CF Nasenepithel
- 4.3 Vergleich der hnENaC Protein Expression in CF und nicht-CF Nasenepithel
- 5 Ausblick
- 6 Zusammenfassung
- 7 Literaturverzeichnis
- 8 Anhang
- 8.1 Verwendete Chemikalien
- 8.2 Verwendete Geräte
- 8.3 Verwendete Marker und Polymerasen
- 8.4 Abkürzungscodes der Aminosäuren
- 8.5 Verwendete Primer
- 8.6 Nukleotid - und Aminosäuresequenz des hnENaC aus CF und nicht-CF Nasenepithel
- Danksagung
- Lebenslauf