Meyer, Lars Henrik: Die Rolle des Four-and-a-half-LIM-only-Protein 2 (FHL2) in der Gelenkzerstörung bei Rheumatoider Arthritis. 2008
Inhalt
- Inhalt
- 1 Zusammenfassung
- 2 Einleitung
- 1.1
- 2.1 Aufbau und Struktur der rheumatoiden Synovia
- 2.2 Die Aktivierung rheumatoider Fibroblasten – der initiale Schritt zur Knorpelzerstörung
- 2.3 Metalloproteasen vermitteln die Degradation der Knorpelmatrix
- 2.4 Proinflammatorische Zytokine stimulieren die Synthese von Matrixmetalloproteasen
- 2.5 TNFα und IL-1 - die zentrale Zytokine in der Knorpeldestruktion
- 2.6 Das Adaptormolekül FHL2 - Aufbau, Expression und Lokalisation
- 2.7 FHL2 beeinflusst durch Bindung an seine Interaktionspartner deren Funktion
- 1.1
- 2.8 FHL2 - ein wichtiger Vermittler in der Wundheilung und Osteogenese.
- 3 Fragestellung der Arbeit
- 4 Ergebnisse
- 4.1 Die Expression von FHL2 in synovialem Gewebe und Primärkulturen synovialer Fibroblasten von RA-Patienten.
- 4.1.1 Die Lokalisation und Expression von FHL2 in synovialem Gewebe
- 4.1.2 Die Expression von FHL2 in Primärzellkulturen synovialer Fibroblasten
- 4.2 Proinflammatorische Zytokine steuern die FHL2-Expression
- 4.2.1 Inflammatorische Zytokine hemmen die FHL2-Expression
- 4.2.2 TNFα induziert ein 20 kDa großes FHL2-Fragment
- 4.2.3 TGFβ induziert die FHL2-Expression in RASF
- 4.3 Die FHL2-Expression im Verlauf der destruktiven Arthritis in der hTNFtg-Maus
- 4.3.1 FHL2-Expression in synovialen Fibroblasten des hTNFtg-Mausmodells
- 4.3.2 Die FHL2-Expression im Verlauf der destruktiven Arthritis ist transient
- 4.3.3 Eine Hemmung der TNFα-Stimulation führt zu gesteigerter FHL2 Expression.
- 4.4 Die FHL2-Defizienz führt zu einer anhaltenden Aktivierung von p38-MAPK
- 4.4.1 FHL2 kolokalisiert mit phospho-p38-MAPK im Nukleus nach TNFα-Stimulation
- 4.4.2 FHL2-defiziente mesenchymale Stammzellen zeigen eine stabile p38-Aktivierung nach TNFα-Stimulation
- 4.5 FHL2 reguliert die MMP-13 Expression
- 4.5.1 FHL2 silencing mittels RNAi-Technologie
- 1.1.1
- 4.5.2 Die RNAi-vermittelte Hemmung der FHL2 Expression steigert die TNFα-induzierte Expression von MMP-1 und MMP-13
- 4.6 Die Überexpression von FHL2 unterbindet die TNF-induzierte MMP-13-Expression
- 4.7 Die Hemmung der FHL2-Expression führt zu einer deutlichen Steigerung der Invasivität rheumatoider Fibroblasten
- 4.7.1 Aufbau und Funktionsweisen des MATRI-Assays
- 4.7.2 Die Hemmung von FHL2 führt zu einer deutlichen Steigerung der Invasivität von RASF
- 4.8 FHL2-Defizienz führt zu einer deutlich gesteigerten Knorpel- und Knochendestruktion in der hTNFtg-Maus.
- 5 Diskussion
- 5.1 FHL2 zeigt im Verlauf der RA ein transientes Expressionsmuster
- 5.2 Proinflammatorische Zytokine hemmen die FHL2-Expression
- 5.3 FHL2 - ein wichtiger Regulator der MMP-13-Expression
- 5.4 Die umfassende Knochenzerstörung in der hTNFtg-FHL2-/--Maus – Ein Hinweis auf die Involvierung aktivierter Osteoklasten?
- 5.5 Schlussfolgerung
- 6 Material und Methoden:
- 6.1 Biologisches Material
- 6.1.1 Eukaryotische Zellen
- 6.1.2 Bakterienstämme
- 6.1.3 Plasmidvektoren und siRNAs
- 1.1.1
- 6.1.4 Primersequenzen
- 1.1.1
- 6.1.5 Antikörper
- 1.1
- 6.2 Chemikalien
- 6.3 Puffer und Lösungen
- 1.1
- 6.4 Bakterielle Kulturmedien
- 6.5 Kulturmedien und Zusätze für eukaryotische Zellen
- 6.6 Molekularbiologische Kits
- 6.7 Histologische Kits
- 6.8 Sonstige Reagenzien
- 6.9 Verbrauchsmaterialien
- 6.10 Geräte und Software
- 1.1
- 6.11 Methoden
- 6.11.1 Tiermodelle
- 6.11.2 Generierung der FHL2-/-hTNFtg Maus
- 6.11.3 Genotypisierung
- 6.11.4 Klinisches Scoring der Arthritisschäden in Mäusen
- 6.11.5 MicroCT-Imaging
- 6.11.6 DNA-Methoden
- 6.11.7 Isolierung von Plasmid-DNA aus Bakterien
- 6.11.8 Protein-Methoden
- 1.1.1
- 6.11.9 Zellkultur-Methoden
- 6.11.10 Immunologische Methoden
- 6.11.11 Histologische Methoden
- 7 Literatur
- 8 Anhang
- 9 Veröffentlichungen
- 10 Danksagung