Steinfurth, Fabian: MicroRNA-Analyse von Laser-mikrodissektiertem Gewebe zur Differenzierung zwischen Pankreaskarzinom, Pankreatitis und gesundem Pankreas. 2014
Inhalt
- I Abkürzungsverzeichnis
- II Verzeichnis der Abbildungen
- III Verzeichnis der Tabellen
- 1 Einleitung
- 2 Das Pankreaskarzinom
- 2.1 Epidemiologie des Pankreaskarzinoms
- 2.2 Ätiologie und Pathogenese
- 2.3 Topographie und Tumorlokalisation
- 2.4 Histologische Einteilung des Pankreaskarzinoms
- 2.5 Klinische Symptomatik
- 2.6 Diagnostik
- 2.7 UICC-Klassifikation und Grading
- 2.8 Therapie
- 2.9 Prognose
- 3 MicroRNAs
- 3.1 miRNAs: Definition, Biosynthese, Modifikation und Funktion
- 3.2 Die Rolle von MicroRNAs in Tumoren
- 3.3 MicroRNA-Deregulation im duktalen Adenokarzinom des Pankreas
- 3.4. Diagnostische Wertigkeit von MicroRNAs beim Pankreaskarzinom
- 3.5. Therapeutische Bedeutung von MicroRNAs beim Pankreaskarzinom
- 3.6. Prognostische Bedeutung von MicroRNAs in Pankreaskarzinomen
- 3.7. Anwendung von MicroRNAs in Diagnostik und Therapie
- 4 Material und Methoden
- 4.1 Studiendesign
- 4.2 Auswahl der Formalin-fixierten Paraffingewebe (FFPE)
- 4.2.1 Pankreaskarzinom-Präparate
- 4.2.2 Präparate der chronischen Pankreatitis
- 4.2.3 Präparate des gesunden Pankreas
- 4.3 Anfertigung und Färbung der FFPE-Schnittpräparate
- 4.3.1 Erstellung der Schnittpräparate gemäß der „Sandwich“-Schnitttechnik
- 4.3.2 Färbung der Schnittpräparate
- 4.4 Histopathologische Reevaluation der Schnittpräparate
- 4.5 Die Laser-Mikrodissektion
- 4.5.1 Prinzip der Laser-Mikrodissektion
- 4.5.2 PALM® MicroBeam
- 4.5.3 Vorbereitung der Laser-Mikrodissektion
- 4.5.4 Durchführung der Laser-Mikrodissektion
- 4.6 RNA-Extraktion der Mikrodissektate
- 4.6.1 Durchführung der RNA-Extraktion unter Nutzung des Qiagen miRNeasy FFPE-Kits
- 4.6.2 Photometrische Kontrolle von RNA- Konzentration und -Reinheit
- 4.6.3 Kryokonservierung der Proben
- 4.7 Quantitative Real-Time-Polymerase-Kettenreaktion (qRT-PCR)
- 4.7.1 Prinzip der quantitativen Real-Time-Polymerase-Ketten-Reaktion
- 4.7.2 Auswahl der Primer und des Housekeeping-Gens
- 4.7.3 Reverse Transkription der RNA in cDNA
- 4.7.4 Durchführung der qRT-PCR
- 4.8 Erfassung patientenbezogener Daten
- 4.9 Statistische Methoden
- 4.9.1 Hilfsmittel zur statistischen Auswertung
- 4.9.2 Untersuchung der klinischen Daten
- 4.9.3 Untersuchung der MicroRNA-Expression in Bezug auf die Pankreasproben
- 4.9.4 Untersuchung von Korrelationen bezüglich der MicroRNA-Expression
- 4.9.5 Untersuchung der rezidivfreien Zeit
- 4.9.6 Untersuchung der Überlebenszeit
- 5 Ergebnisse
- 5.1 Epidemiologische und klinische Aspekte der Patientengruppen
- 5.1.1 Klinische und pathologische Charakteristika der PDAC-Patientengruppe
- 5.1.2 Klinische und pathologische Charakteristika der Pankreatitis-Gruppe
- 5.1.3 Charakteristika der Kontrollgruppe
- 5.2 Die MicroRNA-Expression
- 5.2.1 Expression der untersuchten MicroRNAs in Relation zum Haushaltsgen
- 5.2.2 Die Expression der MicroRNAs miR-21*, miR-155 und miR-196a
- 5.2.3 Die Expression der MicroRNA-200-Familie
- 5.2.4 Zusammenhänge der MicroRNA-Expression
- 5.3 Das diagnostische Potential der untersuchten MicroRNAs
- 5.3.1 Diagnostisches Potential von miR-21*, miR-155 und miR-196a
- 5.3.2 Diagnostisches Potential der MicroRNA-200-Familie
- 5.4. Das prognostische Potential der untersuchten MicroRNAs
- 6 Diskussion
- 6.1 Diskussion der Methode
- 6.1.1 Formalinfixierte Paraffingewebe des Pankreas
- 6.1.2 Festlegung der Untersuchungsgruppen und Auswahl der Proben
- 6.1.3 Die Laser-Mikrodissektion duktaler Zellen
- 6.1.4 Die MicroRNA-Extraktion
- 6.1.5 Die Reinheitskontrolle bei MicroRNA-haltigen Lösungen
- 6.1.6 Die MicroRNA-Detektion mittels qRT-PCR
- 6.1.7 Die Primerauswahl
- 6.1.8 Das Haushaltsgen RNU6-2
- 6.1.9 Kritische Betrachtung der statistischen Auswertung
- 6.2 Bewertung des Patientenkollektivs
- 6.2.1 Patienten mit duktalem Adenokarzinom des Pankreas (PDAC)
- 6.2.2 Patienten mit chronischer Pankreatitis
- 6.2.3 Die Kontrollgruppe der gesunden Pankreata
- 6.3 Diskussion der Ergebnisse
- 6.3.1 Allgemeine Betrachtung der MicroRNA-Expression
- 6.3.2 Die Rolle von miR-21* im duktalen Adenokarzinom des Pankreas
- 6.3.3 miR-155 im duktalen Adenokarzinom des Pankreas
- 6.3.4 miR-196a: Ein potentieller Biomarker des Pankreaskarzinoms
- 6.3.5 Die MicroRNA-200-Familie
- 6.3.6 Die azinäre MicroRNA-Expression
- 6.4 Konklusion
- 6.5 Ausblick
- 7 Zusammenfassung
- 8 Danksagung
- 9 Curriculum vitae
- 10 Quellenverzeichnis
- 11 Appendix