Bendiks, Meike: Effizienz der Gentherapie mit adenoviralen Vektoren bei Ornithintranscarbamylse defizienten Mäusen in Abhängigkeit von OTC-Leadersequenz. 2003
Inhalt
- Abstract
- Inhaltsverzeichnis
- Abbildungsverzeichnis
- Tabellenverzeichnis
- Abkuerzungsverzeichnis
- 1. Einleitung
- 1.1. Harnstoffzyklus
- 1.2. Ornithintranscarbamylase (OTC)
- 1.3. Ornithintranscarbamylase-Mangel
- 1.4. Fragestellung
- 2. Material und Methoden
- 2.1. Geraete und Materialien
- 2.2. Chemikalien
- 2.3. Loesungen und Puffer
- 2.4. Primaere Antikoerper
- 2.5. Sekundaere Antikoerper (Immunogoldmarker)
- 2.6. Versuchstiere
- 2.7. Adenovirale Vektoren
- 2.8. Lysat-Assay
- 2.9. Histochemische Darstellung der Enzymaktivitaet
- 2.10. Gewebepraeparation (Immunelektronenmikroskopie)
- 2.11. Kryoimmunelektronenmikroskopie
- 2.11.1. Grundlagen
- 2.11.2. Befilmung der Praeparattraegernetzchen
- 2.11.3. Glasmesserherstellung
- 2.11.4. Ultrakryomikrotomie
- 2.11.5. Antikoerperbeschichtung
- 2.11.6. Einbettung und Kontrastierung
- 2.11.7. Immunelektronenmikroskopie
- 2.11.8. Fotoentwicklung
- 2.12. Fluoreszenzmikroskopie
- 2.12.1. Polylysin-Beschichtung der Objekttraeger
- 2.12.2. Fluoreszenzfaerbung der Praeparate
- 2.12.3. Mikroskopische Auswertung
- 2.13. Morphometrische Analyse
- 2.13.1. Grundlagen
- 2.13.2. Punkt-Zaehl-Methode
- 2.13.3. Markierungsdichte
- 2.13.4. Oberflaechendichte
- 2.13.5. Volumendichte
- 2.13.6. Absolutes Kernvolumen
- 2.13.7. Absolute Volumina
- 2.13.8. Absolute Goldpartikel--Anzahl
- 2.13.9. Anteil der transfizierten Hepatozyten (Transfektionsrate)
- 2.14. Student-t-Test
- 3. Ergebnisse
- 3.1. Qualitative Analyse der OTC-Enzymaktivitaeten
- 3.2. Ergebnisse des Lysat-Assays
- 3.3. Qualitative Analyse der OTC--Verteilung
- 3.4. Quantitative Auswertung der OTC-Verteilung
- 3.5. Qualitative Analyse der Mitochondriengroesse
- 3.6. Quantitative Auswertung der Mitochondriengroesse
- 3.7. Qualitative Analyse der CPS I-Verteilung
- 3.8. Quantitative Auswertung der CPS I-Verteilung
- 3.9. Qualitative Analyse der ATPase(c)-Molekuele
- 3.10. Quantitative Auswertung der ATPase(c)-Verteilung
- 4. Diskussion
- 4.1. Effizienter Import der transgenen OTC
- 4.2. Einfluss der Leadersequenz auf die Effizienz des Importmechanismus
- 4.3. Korrektur der verminderten Mitochondriengroesse durch die somatische Gentherapie
- 4.4. Partielle Korrektur der CPS I-Konzentration in den spfash-Maeuse
- 4.5. Korrektur der ATP-Verarmung in unbehandelten spfash-Maeuse
- 5. Schlussfolgerungen und Perspektiven
- 6. Zusammenfassung
- 7. Literaturverzeichnis
- 8. Publikationen
- 9. Danksagung
- 10. Tabellarischer Lebenslauf