Söding, Solveig Nicole: Identifizierung neuer potentieller Interaktionspartner von xIAP und Untersuchung ihrer biologischen Funktion. 2005
Inhalt
- I
- A
- Abkürzungen
- Einleitung
- Apoptose
- Die Funktionen von xIAP in Apoptose und Zellzyklus
- Das Zwei-Hybrid-System
- Das klassische Zwei-Hybrid-System
- Das ‚Sos Recruitment System’ (SRS)
- Das ‚Ras Recruitment System’ (RRS)
- Zielsetzung
- Material und Methoden
- Chemikalien
- Enzyme
- Inhibitoren
- Antikörper
- Sonstige Materialien
- Stämme, Medien und Anzucht
- Synthetische Oligonukleotide
- Plasmide
- HUVEC cDNA-Bank
- Transformationen/ Transfektionen
- Transformation von Escherichia coli
- Transformation von Saccharomyces cerevisiae
- Transfektion von Säugetierzellen
- Transduktion von Säugerzellen mit TAT-Fusionsproteinen
- Zwei-Hybrid-Screens
- DNA und RNA Präparation
- Phenol/Chloroform Extraktion
- Plasmid-Präparation aus Escherichia coli
- DNA-Präparation aus Saccharomyces cerevisiae zur Elektropor
- RNA -Präparation aus Säugetierzellen
- DNA Präparation aus Agarosegelen
- RT-PCR
- DNARestriktionsanalyse
- DNA-Ligation
- PCR-Amplifikation von DNA
- Auftrennung von DNAFragmenten über Agarosegele
- Proteinpräparation
- Proteinbestimmung
- Auftrennung von Proteinen über SDS-Polyacrylamidgele
- Western-Blot-Analyse
- In vitro Translation
- Proteinherstellung aus pGEX-Vektoren
- GST-Pulldown
- Apoptoseinduktion bei Säugetierzellen
- Induktion von ER-Stress
- Hypoxie
- Mitochondrienisolierung aus Säugetierzellen
- Ergebnisse
- 2-Hybrid-Screens
- Überprüfung der Interaktion von xIAP mit den neuen potentiel
- GST-Pulldown von xIAP mit den Originalklonen aus den Two-Hyb
- Transfektion von 293 Zellen mit den Klonen 3, 7-4, 15 u. 24
- Immunpräzipitation von NNE und xIAP
- Klonierung der Gene Tim44, mAAT, xXIP und xIAP für die Trans
- Transduktion von HUVEC Zellen mit NNE-TAT
- Expression der Volllängenproteine in T-Rex Zellen
- Untersuchungen zur biologischen Funktion von Tim44, NNE und
- Diskussion
- Two-Hybrid-Screens führen zur Identifikation von sieben neue
- Die Interaktion von xIAP mit Tim44, mAAT, NNE und xXIP ist i
- Tim44 wird nicht aus den Mitochondrien sterbender Zellen aus
- Die Expression der (-Enolase nimmt unter Hypoxie zu
- Die Überexpression von xXIP schützt die Zellen vor Apoptose
- Zusammenfassung
- Literatur
- Erklärung
- Danksagung