Brunnberg, Uta: Die Rolle des Wachstumsfaktors Activin A bei der Organregeneration nach Caerulein-induzierter Pankreatitis der Ratte. 2007
Inhalt
- 1.1 Die akute Pankreatitis
- 1.1.1 Definition, Inzidenz, Einteilung und Mortalität
- 1.1.2 Ätiologie
- 1.1.3 Klinik der akuten Pankreatitis
- 1.1.4 Diagnostik und Beurteilung des Schweregrades
- 1.1.5 Therapie
- 1.2 Pathophysiologische Mechanismen im Verlauf der akuten Pankreatitis
- 1.2.1 Intraazinäre Aktivierung von proteolytischen Enzymen
- 1.2.2 Störungen der Mikrozirkulation
- 1.2.3 Leukozyteninfiltration, Freisetzung von Zytokinen und Bildung von reaktiven Sauerstoffspezies
- 1.2.4 Regeneration des Gewebes
- 1.3 Aufbau und Funktion von Activinen, Inhibinen und Follistatin
- 1.4 Pankreatitisinduktion durch hormonelle Hyperstimulation im Tiermodell
- 1.5 Fragestellung der Arbeit
- 2 Material und Methoden
- 2.1 Material
- 2.1.1 Chemikalien und Verbrauchsmaterialien
- 2.1.2 Geräte
- 2.1.3 Software und Statistik
- 2.1.4 Puffer, Medien und Lösungen
- 2.1.5 Antikörper, Assays und rekombinante Proteine
- 2.1.5.1 Primäre Antikörper
- 2.1.5.2 Sekundäre Antikörper
- 2.1.5.3 Rekombinante Proteine
- 2.1.5.4 Assays
- 2.1.6 Oligonukleotide
- 2.2 Tiermodell
- 2.2.1 Versuchstiere
- 2.2.2 Isolation von Pankreasazinuszellen
- 2.2.3 Operationsverfahren
- 2.2.4 Induktion einer akuten Caerulein-induzierten Pankreatitis bei der Ratte
- 2.3 Proteinchemische Methoden
- 2.3.1 Herstellung von Pankreashomogenaten
- 2.3.2 Protein-Konzentrationsbestimmung
- 2.3.3 SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese
- 2.3.4 Proteintransfer auf Nitrozellulosemembranen (Western-Blot)
- 2.3.5 Immunoblot
- 2.3.6 Detektion mit dem ECL-Verfahren
- 2.3.7 Herstellung von Zelllysaten aus Pankreasazinuszellen
- 2.3.8 Bestimmung der Amylasesekretion nach in vitro Stimulation mit Cholezystokinin
- 2.4 Molekularbiologische Methoden
- 2.4.1 DNA-Konzentrationsbestimmung
- 2.4.2 Isolierung von Gesamt-RNA
- 2.4.3 RT-PCR (Reverse Transkription-Polymerasekettenreaktion)
- 2.4.4 Gelelektrophorese
- 2.5 Bestimmung von Proliferation und Apoptose
- 2.5.1 BrdU-Proliferationstest an isolierten Azini
- 2.5.2 Bestimmung der Apoptoserate an Kryoschnitten
- 2.5.3 Bestimmung der Proliferationsrate durch PCNA-Markierung an Paraffinschnitten
- 2.6 Immunfluoreszenzmikroskopie
- 3 Ergebnisse
- 3.1 Apoptose und Proliferation im Verlauf der Pankreatitis
- 3.2 RNA-Expressionsanalyse von Faktoren des Activin/Inhibin-Systems und ihrer Rezeptoren während der akuten Pankreatitis
- 3.3 Activin und Activin-Rezeptor IIB Expression während der akuten Pankreatitis
- 3.4 Activin und Activin-Rezeptor Expression an isolierten Azinuszellen des Pankreas
- 3.5 Stimulation der Proliferation von Azini des Rattenpankreas durch Activin A
- 3.6 Blockade der Interleukin-induzierten Azinuszellproliferation durch Follistatin
- 4 Diskussion
- 4.1 Apoptose und Proliferation während der Pankreatitis
- 4.2 Activin-Expression im Verlauf der Pankreatitis: Ein autokriner proliferationsfördernder Mechanismus im exokrinen Anteil?
- 4.3 Funktion von Follistatin während der Pankreatitis
- 4.4 Zusammenfassung und Ausblick
- 5 Literaturverzeichnis
- Danksagung
- 7 Lebenslauf