Blum, Christian: In-vitro-Untersuchung einzelner fluoreszierender Proteine mit spektral und zeitlich aufgelöster Fluoreszenzspektroskopie. 2004
Inhalt
- Zusammenfassung
- Abstract
- Einleitung
- Grundlagen
- Das Prinzip der Einzelmolekül-Fluoreszenzmikrosk
- Lichtabsorption und -emission von Molekülen
- Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer
- Fluoreszenzdynamik und Streuung spektraler Parameter
- Fluoreszierende Proteine
- Methoden
- Experimenteller Aufbau zur Einzelmolekülspektros
- Datenaufnahme und Datenverarbeitung
- Datenaufnahme
- Verarbeitung der Rohdaten
- Das Hintergrundsignal
- Sichtung der Spektren
- Erstellen von Histogrammen und Korrelationsdiagrammen verschiedener spektraler Parameter
- Probenpräparation
- Ensemblespektroskopie
- Spektrale Eigenschaften der fluoreszierenden Proteine
- Aequorea GFP und dessen Varianten
- Aequorea GFP
- EGFP
- EYFP
- Bekanntes Fluoreszenzverhalten einzelner Proteine von Aequorea GFP und dessen Varianten
- DsRed und dessen Varianten
- Fluoreszenzspektroskopische Untersuchungen auf Ei
- Einzelmolekül Fluoreszenzspektroskopie an EYFP u
- Quantenausbeuten des Photobleichens von EYFP und EGFP
- EYFP - Verteilung der Einzelmolekülfluoreszenz M
- Die I-Form und B-Form von EYFP
- Langwellig fluoreszierende Formen von EYFP
- Anzahlen der Proteine, die Fluoreszenz der seltenen Formen zeigen
- EGFP- Verteilung der Einzelmolekülfluoreszenz Ma
- Einzelmolekül-Fluoreszenzdynamik
- Umwandlungen der EYFP Formen ineinander
- Umwandlungen zwischen B-Form und I-Form
- Fluoreszenzdynamik zwischen EGFP I-Form Spektren und bathochrom verschobenen Spektren
- Die langwellig fluoreszierenden Formen von EYFP u
- Spektrale Verteilung und Diffusion ohne Formumwandlung bei EYFP und EGFP
- Spektrale Verteilung der Maximumlagen der vorherrschenden Formen
- Spektrale Diffusion der Maximumlagen der Emission
- Spektrale Diffusion der Maximumlagen bei den langwelligen Formen
- Intensitätsfluktuationen der Emission
- DsRed und Varianten
- Anzahl der emittierten Photonen pro Oligomer für
- Einzelmolekülspektren und deren Verteilung der s
- DsRed
- E5
- DsRed-2
- AG4
- E8
- Seltene spektrale Formen von DsRed und dessen Varianten
- Vergleich der Standardabweichungen der Verteilungen der Maximumpositionen
- Spektrale Diffusion von DsRed und dessen Varianten
- Abschätzung der Auswirkung spektraler Verschiebu
- Fluktuationen der Fluoreszenzintensität
- Kopplung unterschiedlicher Chromophore via FRET
- Untersuchungen zum Anzahlverhältnis zwischen ger
- Zusammenfassung
- Literatur