Mußmann, Anke: Validierung von Vps54 als ursächliches Gen der Neurodegeneration Wobbler der Maus und Charakterisierung seiner Aufgabe innerhalb der Embryonalentwickl [...]. 2006
Inhalt
- Inhaltsverzeichnis.doc
- Zusammenfasssung.doc
- Einleitung.doc
- 1 Einleitung
- Material und Methoden.doc
- 2 Material und Methoden
- 2.1 Material
- 2.1.1 Mausstämme
- 2.1.2 Bakterienstämme
- 2.1.3 Verwendete Vektoren
- 2.1.4 Oligonukleotide
- 2.1.5 Enzyme
- 2.1.6 Längenstandart
- 2.1.7 DNA-Extraktionspuffer zur Isolierung aus Schwanzspitzen
- 2.1.8 15,72 Glucose, Phosphate buffered saline (PBS)
- 2.1.9 Bakterienkulturmedien
- 2.1.10 Antibiotika
- 2.1.11 Verwendete Kits
- 2.1.12 Färbelösungen
- 2.1.13 Verwendete Erstantikörper
- 2.1.14 Verwendete Zweitantikörper
- 2.1.15 Verwendete Datenbanken
- 2.2 Methoden
- 2.2.1 Polymerase Chain Reaction (PCR)
- 2.2.1.1 Standart PCR-Reaktion
- 2.2.1.2 Standart PCR mit Q-Solution
- 2.2.1.3 Gradienten-PCR
- 2.2.1.4 Kolonie-PCR
- 2.2.1.5 Proofreading Polymerasen
- 2.2.2 Gelelektrophorese
- 2.2.3 Bakterien-Methoden
- 2.2.3.1 Anzucht von Bakterien
- 2.2.3.2 Kryokulturen
- 2.2.3.3 Easy-Präp
- 2.2.3.4 Alkalische Lyse
- 2.2.3.5 Säulen-Aufreinigung
- 2.2.3.6 Ligation
- 2.2.4 DNA-Methoden
- 2.2.4.1 DNA-Isolierung aus Gewebe
- 2.2.4.2 DNA-Extration aus Agarosegelen
- 2.2.4.3 Restriktionsenzymspaltungen
- 2.2.4.4 Fällung von DNA
- 2.2.4.5 Southern Blotts
- 2.2.4.6 Generierung von Sonden
- 2.2.4.7 Hybridisierung und Nachweis
- 2.2.5 Konzentrationsmessungen von Nukleinsäuren
- 2.2.6 Diagnostik und Genotypisierung der Mäuse
- 2.2.6.1 Isolierung von DNA aus Schwanzspitzen
- 2.2.6.2 Isolierung von DNA aus Haarproben
- 2.2.6.3 CcT4-Diagnostik
- 2.2.6.4 Vps54 β-geo-Diagnostik
- 2.2.6.5 BAC-transgenen Diagnostik
- 2.2.7 RNA-Methoden
- 2.2.7.1 TotalRNA-Isolierung aus Gewebe
- 2.2.7.2 mRNA-Isolierung
- 2.2.7.3 RNA-Gelelektrophorese
- 2.2.7.4 Reverse Transkription (RT)
- 2.2.7.5 Realtime PCR
- 2.2.8 Bestimmung des Blutgelukosegehaltes
- 2.2.9 Zyklusuntersuchung, Superovulation und Zygotentransfer
- 2.2.10 Gewichtsmessungen
- 2.2.11 Kraftmessungen
- 2.2.12 Histologische Methoden
- 2.2.12.1 Paraffineinbettung
- 2.2.12.2 Parafinschnitte
- 2.2.12.3 Entparafinierung
- 2.2.12.4 Gefrierblöcke
- 2.2.12.5 Gefrierschnitte
- 2.2.12.6 Antikörperfärbung
- 2.2.12.7 Hoechstfärbung
- 2.2.12.8 Nisslfärbung
- 2.2.12.9 Hämatoxylion-Eosin-Färbung
- 2.2.12.10 ß-Galaktosidase-Färbung
- 2.2.12.11 Confokale Laserscanning Mikroskopie (CLSM)
- Ergebniss1.doc
- Ergebnis2.doc
- Ergebnis3.doc
- 3.5 Vps54 β-geo-Allel
- 3.5.1 Expression von Vps54 und des Vps54 β-geo-Allels
- 3.5.1.1 Analyse der Vps54 Expression in Vps54 β-geo-Tieren
- 3.5.1.2 Expression der β-geo-LacZ-Kassette
- 3.5.2 Komplex-hetereozygote Tiere
- 3.5.3 Heterozygote Vps54 β-geo Tiere
- 3.5.4 Homozygote Vps54 β-geo-Tiere
- 3.5.5 Geplanter konditionaler Knockout von Vps54:
- Disskussion.doc
- 4 Diskussion
- 4.1 Charakterisierung der Wobbler-Mäuse
- 4.1.1 Die Gametogenese
- 4.1.2 Futterakkumulation im Magen
- 4.1.3 Metabolomanalyse
- 4.1.4 Vimentinablagerungen
- 4.2 BAC-Kompensation und komplex-heterozygote Tiere
- 4.3 Vps54 β-geo-Allel
- 4.4 Motoneuronendegenerationen und Vesikeltransport
- 4.5 Globozoospermien und Vesikeltransport
- 5 Ausblick
- Literatur.doc
- Anhang.doc
- Dankesagung.doc