Inhalt

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   Seiten aus Bearbeitet Vorlage Anhang Diss 2 Feb .pdf
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  Bearbeitet Diss Marlies Brinkmann So 1 Feb ohne Anhang .pdf
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    Zusammenfassung
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  1 Einleitung
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  1.1 Biologischer Hintergrund
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   1.1.1 Adulte Stammzellen
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   1.1.2 Ursprung der dentalen Zellen - die Neuralleiste
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   1.1.3 Zahnentwicklung
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   1.1.4 Dentale Zellen aus Zahnkeimen des dritten Molaren
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   1.2 Arbeitsziel
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  2 Material und Methoden
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  2.1 Archivierung der Zahngewebe (Datenbank)
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   2.1.1 Erhobene Daten
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   2.1.2 Strukturierung der Tabellen
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   2.1.3 Organisation der Datenbank
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   2.1.4 Datenbank–Abfragen
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  2.2 Zelllinien
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  2.2.1 Primärkulturen aus Patientenspenden
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   2.2.1.1 Isolierung der Zellen aus Zahngewebe
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   2.2.1.2 Isolierung von Knochenmarkzellen
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   2.2.2 Referenz-Zelllinien
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  2.3 Zellkultivierung
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   2.3.1 Kulturmedien
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   2.3.2 Passagieren der Zellen
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   2.3.3 Kryokonservierung
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   2.3.4 Bestimmung zellspezifischer Parameter
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  2.4 Differenzierung der Zellen
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   2.4.1 Osteogene Differenzierung
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   2.4.2 Neurogene Differenzierung
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  2.5 Einzelzellkulturen
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   2.5.1 Limiting Dilution
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   2.5.2 Einzelzellablage (FACS-Gerät)
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  2.6 Analysemethoden
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  2.6.1 Bestimmung der Zellzahl
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   2.6.1.1 Trypanblau-Methode invasiv (Neubauer-Zählkammer)
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   2.6.1.2 Nicht invasive Bestimmung der Zellzahl
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   2.6.2 Kalziumnachweis
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   2.6.2.1 Qualitativer Nachweis
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   2.6.2.2 Quantitativer Nachweis
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  2.6.3 Durchflusszytometrie (FACS-Gerät)
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   2.6.3.1 Messprinzip und Grundausstattung
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   2.6.3.2 Charakterisierung der Zellen
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   2.6.3.3 Sortierung der Zellen
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  2.6.4 mRNA-Analyse
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   2.6.4.1 RNA Isolation und cDNA-Synthese
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   2.6.4.2 PCR (Polymerase Chain Reaction)
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   2.6.4.3 Real-time PCR
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   2.7 Charakterisierung der Zelloberflächenproteine  Antikörper
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   2.8 Untersuchung der Genexpression – Primer
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  2.9 Material
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   2.9.1 Medien
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   2.9.2 Medienzusätze und Wachstumsfaktoren
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   2.9.3 Geräte und Gebrauchsmaterial
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   2.9.4 Chemikalien
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   2.9.5 Verbrauchsmaterial
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  3 Ergebnisse
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  3.1 Archivierung der Zahngewebe (Datenbank)
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   3.1.1 Abfrage mit direkter Auflistung
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   3.1.2 Abfrage mit einer Auswahlabfrage
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   3.1.3 Abfrage mit zwei kombinierten Auswahlabfragen
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   3.1.4 Auswertung der Datenabfragen
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  3.2 Osteogene Differenzierung dentaler Primärkulturen
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   3.2.1 Kalzifizierung dentaler Primärkulturen
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  3.2.2 Vergleich verschiedener dentaler Primärkulturen
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   3.2.2.1 Gegenüberstellung der Kalzifizierung
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   3.2.2.2 Gegenüberstellung der Genexpression
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   3.2.2.2.1 Bonesialoprotein (IBSP)
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   3.2.2.2.2 Osteokalzin (BGLAP)
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   3.2.2.2.3 Runt related transkription factor 2 (RUNX2)
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   3.2.2.2.4 Alkalische Phosphatase (ALPL)
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  3.3 Neurogene Differenzierung dentaler Primärkulturen
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  3.3.1 Morphologie und Proliferationsverhalten, Einfluss der Medium komponenten
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   3.3.1.1 Dentale Primärzellen DZB-202p5
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   3.3.1.1.1 Reaktion auf neurogenes Differenzierungsmedium
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   3.3.1.1.2 Einfluss der Mediumkomponenten
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  3.3.1.2 Dentale Primärzellen DZB-403p5
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   3.3.1.2.1 Reaktion auf neurogenes Differenzierungsmedium
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   3.3.1.2.2 Reaktion bei Zusatz osteogener Differenzierungskomponenten
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  3.3.1.3 Dentale Primärzellen DZB-404p7
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   3.3.1.3.1 Reaktion auf „neurogenen Shift“ von 5 Tagen
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  3.3.1.4 Dentale Primärzellen DZB-404p5
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   3.3.1.4.1 Reaktion auf „neurogenen Shift“ von vier Tagen
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   3.3.1.5 Gesamtdarstellung der Proliferation in unterschiedlichen Medien
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  3.3.2 Genexpression, Einfluss der Mediumkomponenten
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   3.3.2.1 Dentale Primärkultur DZB-403p5
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   3.3.2.1.1 Neurofilament-H (NEFH)
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   3.3.2.1.2 Neurofilament-L (NEFL)
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   3.3.2.1.3 Myelin Basic Protein (MBP)
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   3.3.2.2 Dentale Primärkultur DZB-404p5
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   3.3.2.2.1 Genexpression von Neuromarkern
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   3.3.2.2.2 Genexpression von Osteomarkern
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  3.4 Subpopulationen und Einzelzellen aus dentalen Primärkulturen
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  3.4.1 Granularität und Größe der Zellen aus Subpopulationen
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   3.4.1.1 Dentale Primärzellen DZB-201p8
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   3.4.1.2 Dentale Primärzellen DZB-202p8
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   3.4.2 Analyse von Subpopulationen P1 und P2 der Primärkulturen
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   3.4.2.1 Oberflächenproteine der dentalen Primärzellen DZB-201
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   3.4.2.2 Oberflächenproteine der dentalen Primärzellen DZB-202
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   3.4.3 Vereinzelung aus Mischpopulationen
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  3.4.4 Proliferationsuntersuchung der vereinzelten Primärkulturen
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   3.4.4.1 Einzelzellen aus der dentalen Primärkultur DZB-201p8
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   3.4.4.2 Einzelzellen aus der dentalen Primärkultur DZB-202p8
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   3.4.5 Selektion CD13-markierter Zellen aus DZB-201p8
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  3.4.6 Charakterisierung der Klone
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   3.4.6.1 Oberflächenproteine eines Klons (FACS-Untersuchung)
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   3.4.6.2 Osteogene Differenzierung der Klone
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  4 Diskussion
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   4.1 Archivierung der Zahngewebe (Datenbank)
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   4.2 Osteogene Differenzierung dentaler Primärkulturen
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   4.3 Neurogene Differenzierung dentaler Primärkulturen
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   4.4 Subpopulationen und Einzelzellen dentaler Primärkulturen
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   4.5 Schlussbetrachtung
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   5 Literaturverzeichnis
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