Lotte, Kirsten: 3D-Fluoreszenzspektroskopie mit Tryptophan und Tryptophan-Analoga : von Lösungsmitteleinflüssen zu Proteinkonformationen. 2004
Inhalt
- Einleitung
- Theoretische Grundlagen
- Grundlagen der Fluoreszenzspektroskopie
- Absorption von Strahlung im Grundzustand
- Lumineszenz aus dem angeregten Zustand
- Fluoreszenzlöschung \〰〨Quenching\〰〩
- Fluoreszenzlebenszeiten
- Quantenausbeuten
- Lösungsmitteleinfluss auf die Fluoreszenz
- Lösungsmittelrelaxation
- Die Lippert-Gleichung
- Lösungsmittelpolaritäten
- Einfluss des Lösungsmittels auf Fluoreszenzeigen
- Bestimmung von Quantenausbeuten in Lösungsmittel
- Proteinfluoreszenz und Proteinstruktur
- Intrinsische Fluorophore
- Merkmale der Proteinstruktur
- Vorhersage der Proteinstruktur
- Einfluss der Proteinstruktur auf die Fluoreszenz
- Tryptophan-Analoga
- Beschreibung der spektralen Form
- Fluoreszenzspektroskopische Untersuchungsmethoden
- Bestimmung der Fluorophorexposition über Quenchi
- Dynamisches Quenching & Stern-Volmer-Auftragungen
- ‚Quenching Sphere of Action’ – die Aktionssphäre
- Statisches Quenching
- Unterscheidung zwischen statischem und dynamischen Quenching
- Kombiniertes Quenching
- Quencher
- Abstandsbestimmungen über FRET
- Bestimmung von Entfaltungsenthalpien
- Fluoreszenzspektroskopische Bestimmung von Dissoziationskonstanten
- Experimenteller Aufbau und Datenanalyse
- Aufbau für Anregungs-Emissions-Spektroskopie
- Aufbau für zeitaufgelöste Laserinduzierte Fluore
- Der Titan:Saphir-Laser
- Verstärkung und Frequenzverdreifachung
- Detektion
- Datenbearbeitung und -auswertung
- Kalibration
- Die spektrale Auflösung
- Kalibration der Detektionseffizienz
- Kalibration der Anregungsintensität der AES
- Absorption
- Probenpräparation
- Tryptophanfluoreszenz in wässriger Lösung
- Fragestellung
- Charakteristika des statischen Spektrums
- Anregungsmaximum
- Emissionsmaximum
- Beschreibung des Spektrums als Lognormal-Verteilung
- Quantenausbeute
- Halbwertsbreite des Emissionsspektrums
- Stokes Shift
- Fluoreszenzlebenszeiten
- Quenching von Tryptophan in wässriger Lösung
- Lösungsmittelabhängige Fluoreszenz ausgewählter
- Fragestellung
- Spektroskopische Separation der Tryptophan-Analoga
- Spektren der Tryptophan-Analoga in wässriger Lös
- Anregungsmaxima
- Emissionsmaxima
- Quantenausbeuten
- Fluoreszenz-Lebenszeiten in Wasser
- Korrelation von Quantenausbeuten und Lebenszeiten
- Emissions-Halbwertsbreiten
- Stokes Shifts
- Zusammenfassung
- Quenchinguntersuchungen an Tryptophan-Analoga
- Fragestellung
- Quenching der Tryptophan-Analoga
- Ermittlung von Stern-Volmer-Konstanten
- Ermittlung von bimolekularen Quenchkonstanten
- Zusammenfassung
- Das redoxabhängige Protein 2Cystein Peroxiredox
- Biologische Relevanz
- Strukturelle Vorüberlegungen
- Fragestellung
- Fluoreszenzanalyse der 2-CP-Mutanten W99L und W189L
- Anregungs-Emissionsspektren von 2-CP
- Emissionsspektren des 2-Cystein Peroxiredoxins
- Fluoreszenzlebenszeit-Untersuchungen
- Untersuchung der redoxabhängigen Oligomerisierun
- Emissionsspektren
- Fluoreszenzlebenszeiten der Proteine im reduzierten Zustand
- Quenching-Untersuchungen am 2-Cystein Peroxiredoxin
- Umgebungsanalyse von Trp189 mit Mutanten
- Zusammenfassung
- Das Manganstabilisierende Protein
- Biologische Relevanz und Fragestellung
- Generelle Fluoreszenzeigenschaften
- AES: Apo-MSP im nativen und denaturierten Zustand
- Anregungsspektren für natives bzw. denaturiertes
- Vergleich der Emissionsspektren bei 280 und 295
- Quenching-Untersuchungen am MSP-Tryptophan
- Stabilität des MSP - Entfaltungsstudien
- Chemische Denaturierung mit Harnstoff und Guanidinium-Hydrochlorid
- Veränderung der Emissionsspektren bei Denaturier
- Entfaltung von oxidiertem Apo-MSP – Betrachtung d
- Entfaltung von oxidiertem Apo-MSP - Veränderung
- Ionenbindung des MSP
- Anregungs- und Emissionsspektren für Ionenbindun
- Fluoreszenz-Lebenszeiten von Apo- und Holo-Formen des MSP
- Entfaltungsstudien an verschiedenen Holo-MSP
- Veränderung des Emissionsmaximums
- Veränderung der Fluoreszenzintensitäten
- Freie Entfaltungs-Enthalpien
- Bindungsstudien mit Hilfe von statischen Fluoreszenzuntersuchungen
- Zusammenfassung
- Zusammenfassung und Ausblick
- Anhang
- Verzeichnis der verwendeten Abkürzungen
- Die Kurzschreibweise der biogenen Aminosäuren
- Abkürzungen verwendeter Tryptophan-Analoga
- Lösungsmittelparameter der eingesetzten Alkohole
- Literatur