Roß, Joachim: Aufdeckung der räumlichen Wechselwirkungen einzelner Biomoleküle mittels Fluoreszenz-Resonanz-Energietransfer (FRET) und alternierender Laseranregung. 2006
Inhalt
- Einleitung
- Theoretische Grundlagen
- Fluoreszenzspektroskopie
- Konfokale Fluoreszenzmikroskopie
- Einzelmolekülspektroskopie
- Prinzip der alternierenden Laseranregung
- Multidimensionale alternierende Laseranregung
- Berechnung der Fret--Effizienz aus TrALEx--Daten
- Übersprechen und Direktanregung der Fluoreszenz in andere Detektionskanäle bei TrALEx
- Darstellung der TrALEx--Daten
- Vakuoläre H+--ATPase
- Material und Methoden
- Konfokaler Aufbau
- Anregungsquelle
- Selektion der Wellenlängen
- Mikroskop
- Objektiv
- Filter und Dichroite
- Detektoren
- Zählkarte
- xyz--Scanner
- Steuerung des TrALEx--Aufbaus und Auswertung
- Aufbau eines Modellsystems für Multistep--Fret
- Bursterkennung
- Empfindliche Fluoreszenzspektroskopie
- Ensemblespektroskopie
- FCS
- Verwendete Farbstoffe und deren Eigenschaften
- Koppeln von Farbstoffen an DNA und Protein
- Hybridisierung
- Präparation von Oberflächen
- Passivierung
- Immobilisierung durch unspezifische Wechselwirkung
- Immobilisierung in wässriger Umgebung
- Präparation der Proteinkomplexe und der Untereinheiten
- Ergebnisse und Diskussion
- TrALEx
- Bestimmung der --Faktoren mit Oligoprolinen
- Prinzip TrALEx am photonischen Draht
- Das Modellsystem DNA--Stern
- Die vakuoläre H+--ATPase
- Zusammenfassung und Ausblick