Hagenstein, Miriam Céline: Reversible Kinaseinhibitoren als Werkzeuge in der funktionellen Proteomik. 2006
Inhalt
- Einleitung
- Theorie
- Proteomik
- Proteinkinasen
- Isochinolinsulfonamide als Proteinkinaseinhibitoren
- Oberflächenplasmonresonanz
- Photoaffinitätsmarkierung
- Zielsetzung
- Ergebnisse und Diskussion
- Synthese der chemischen Sonde 1
- Synthese von Sonden-Derivaten für die Oberflächenplasmonreso
- Synthese eines biotinylierten Sonden-Derivates
- Synthese des immobilisierbaren Derivates 12
- Synthese von Kontrollverbindungen für SPR-Untersuchungen bzw
- Oberflächenplasmonresonanz-Studien
- Proteine
- Bindungsversuche mit dem Streptavidin-Sensorchip
- Immobilisierung von 12 auf dem CM5-Sensorchip
- Bindung von Proteinkinase A an immobilisiertem 12
- Kompetition mit H-9 und ATP
- Bestimmung der Gleichgewichtsdissoziationskonstanten KD für
- SPR-Experimente mit Kontrollderivaten
- Bindung von Kreatinkinase an dem immobilisierten Liganden 12
- Photoaffinitätsmarkierung
- Photoaffinitätsmarkierung verschiedener Kinasen mit dem H9
- Photoaffinitätsmarkierung in realen Proteingemischen
- Kontrollexperimente bezüglich der mechanismusbasierten Marki
- FRET-Untersuchungen
- Effizienz der Photoaffinitätsmarkierung mit Bpa
- Versuche zur Synthese einer nukleophil spaltbaren chemischen
- Synthese eines H9-Derivates für die Affinitäts-chromatograp
- Synthese eines neuen Linkers bzw. Bausteins
- Zusammenfassung und Ausblick
- Experimenteller Teil
- Allgemeine Angaben zu den chemischen Experimenten
- Lösungsmittel und Chemikalien
- Allgemeine Angaben zu den biochemischen Experimenten
- Synthesen
- Analytische Daten der chemischen Sonde (S)-N-[Fluorescein-5(
- Synthese des biotinylierten Derivates 8
- Synthese des immobilisierbaren Derivates 12
- Synthese der Kontrollderivate
- Versuche zur Synthese einer nucleophil spaltbaren Sonde
- Synthese eines H9-Derivates für die Affinitätschromatograph
- Synthese eines neuen Linkers bzw. eines Bausteins für die Da
- SPR-Messungen
- Immobilisierung der Biotin-Variante 8 auf dem SA-Chip
- Bindungsexperimente mit PKA/Kreatinkinase (SA-Chip)
- Immobilisierung des Derivates 12 auf dem Sensorchip CM5
- Bindungsexperimente mit PKA/Kreatinkinase (CM5-Chip)
- Immobilisierung von 52 bzw. H9 auf dem Sensorchip CM5
- Bindungsexperimente mit PKA an immobilisiertem 52 bzw. H9
- Photoaffinitätsmarkierung
- SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE)
- Literaturverzeichnis